✨ EnvLab · 仪器操作培训

液相色谱仪

📌 备注：示例机型 Agilent 1260 · 依据受控操作规程构建（已脱敏）

HPLC · 高沸点 / 热不稳定化合物分离定量

200bar 压力上限建议

5ml/min Purge 流速

30min基线平衡

10%用盐后先冲有机-水

原理

它在测什么，怎么测

高效液相色谱（HPLC）是环境检测里分离高沸点、热不稳定、离子型化合物的主力——多环芳烃、农药、酚类、阴离子表面活性剂都靠它。样品由高压泵推着流动相流过色谱柱，组分在固定相中分配不同先后流出，被紫外 / 荧光 / 示差检测器定量。和 GC 不同，HPLC 不怕热，但最怕气泡、怕盐析出、怕柱压骤变。

💧

高压泵推流动相

四元泵按配比输送流动相（建议压力上限设 200bar）。流动相必须过滤、超声脱气，否则气泡进柱会让柱压剧烈波动。

流动相是命门

🫧

Purge 排尽气泡

开机先开 Purge 阀（逆时针），各通道 5ml/min 排气至无气泡，再关阀顺时针冲洗。气泡没排尽就进样 = 鬼峰、柱压不稳。

排气红线

🧂

缓冲盐要冲干净

用了缓冲盐的流动相，关机必须先 10% 有机-水冲洗，再纯有机冲洗。直接上纯有机 → 盐析出堵柱，柱报废。

盐析出红线

📋

受控操作规程依据

合并两份真实受控作业指导书（1260 紫外/荧光版 + 1260 示差版），顺序与红线均按其原文提炼。

操作规程双型号

下面这台模拟器，流动相没脱气就进样、气泡没排尽就关阀、用盐不冲洗，系统都会拦你——这正是真实 HPLC 最毁柱、最出鬼峰的几步。

✨ 液相色谱仪操作模拟台（Agilent 1260）

依据真实受控操作规程（双型号合并）

⏳ 待配制流动相 Agilent 1260 · 四元泵 + 检测器

—

柱前压力 (bar) · >10bar 应换排气阀过滤白头

① 流动相准备（必须先做）

本批是否用缓冲盐流动相？

② 开机（自上而下依次开模块电源 → 联机 CP）

开模块电源自上而下

联机 CPstep 2

③ Purge 排气泡（开阀逆时针 → 各通道 5ml/min 排气 → 关阀顺时针）

开Purge阀逆时针

各通道排气A/B/C/D

关Purge阀顺时针

④ 冲洗平衡（20–30min，柱压稳定、基线平稳）

⑤ 进样分析

⑥ 关机维护（缓慢降流速；用盐先冲 10% 有机-水，再纯有机）

缓慢降流速防柱压骤变

10%有机-水冲用盐必做

纯有机冲洗step 3

关模块电源最后

操作规程关键点

这两份受控作业指导书，卡的就是这几条

下面是从真实操作规程里直接提炼的红线。模拟台每一条都做了校验：

⚗️

流动相必须过滤+脱气

水相用新制超纯水（超 2 天更换），有机相乙腈超 1 个月更换。未过滤未脱气 → 气泡进柱、柱压剧烈波动、出鬼峰。

流动相红线

🫧

Purge 必须排尽气泡

开 Purge 阀（逆时针）→ 5ml/min 各通道排气至管路无气泡 → 关阀（顺时针）冲洗。柱前压力 >10bar 应换排气阀过滤白头。气泡没排尽就进样 = 柱压不稳。

排气红线

🧂

用盐后两段冲洗

用了缓冲盐，关机必须先 10% 甲醇/乙腈-水冲洗，再用纯有机相冲洗。直接上纯有机 → 盐析出堵柱，柱报废。这是 HPLC 最常见的毁柱操作。

盐析出红线

📉

缓慢改变流速

泵开始和结束前注意缓慢改变流速。流速骤变 → 柱压骤变 → 填料塌陷或松动、柱压下降、柱效尽失。

柱压红线

HPLC 没有 GC 那种「高温断载气」的瞬间爆炸风险，但气泡、盐析出、柱压骤变是慢刀子割肉——柱子和色谱柱一年好几万。把它做成可交互培训，新人先把「脱气 → 排气 → 两段冲盐」走熟，比背操作规程直观得多。